1 適用范圍
本標準規定了測定水中五日生化需氧量(BOD5）的稀釋與接種的方法。
本標準適用于地表水、工業廢水和生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的測定。
方法的檢出限為0.5 mg/L，方法的測定下限為2 mg/L，非稀釋法和非稀釋接種法的測定上限為 6 mg/L，稀釋與稀釋接種法的測定上限為6 000 mg/L。
2 規范性引用文件
本標準內容引用了下列文件中的條款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本適用于本標準。
GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法
GB/T 7489 水質 溶解氧的測定 碘量法
GB/T 11913 水質 溶解氧的測定 電化學探頭法
HJ/T 91 地表水和污水監測技術規范
3 方法原理
生化需氧量是指在規定的條件下，微生物分解水中的某些可氧化的物質，特別是分解有機物的生物化學過程消耗的溶解氧。通常情況下是指水樣充滿完全密閉的溶解氧瓶中，在(20±1)℃的暗處培養5d士4h或(2+5) d±4h[先在0-4℃的暗處培養2d，接著在(20土1)℃的暗處培養5d，即培養 (2+5) d]，分別測定培養前后水樣中溶解氧的質量濃度，由培養前后溶解氧的質量濃度之差，計算每升樣品消耗的溶解氧量，以BOD5形式表示。
若樣品中的有機物含量較多，BOD5的質量濃度大于6 mg/L，樣品需適當稀釋后測定；對不含或含微生物少的工業廢水，如酸性廢水、堿性廢水、高溫廢水、冷凍保存的廢水或經過氯化處理等的廢水，在測定BOD5時應進行接種，以引進能分解廢水中有機物的微生物。當廢水中存在難以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有機物或含有劇毒物質時，應將馴化后的微生物引入水樣中進行接種。
4 試劑和材料
本標準所用試劑除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純化學試劑。
4.1 水：實驗用水為符合GB/T 6682規定的3級蒸餾水，且水中銅離子的質量濃度不大于0.01 mg/L, 不含有氯或氯胺等物質。
4.2 接種液：可購買接種微生物用的接種物質，接種液的配制和使用按說明書的要求操作。也可按以下方法獲得接種液。
4.2.1 未受工業廢水污染的生活污水：化學需氧量不大于300mg/L，總有機碳不大于100 mg/L。
4.2.2 含有城鎮污水的河水或湖水。
4.2.3 污水處理廠的出水。
4.2.4 分析含有難降解物質的工業廢水時，在其排污口下游適當處取水樣作為廢水的馴化接種液。也可取中和或經適當稀釋后的廢水進行連續曝氣，每天加入少量該種廢水，同時加入少量生活污水，使適應該種廢水的微生物大量繁殖。當水中出現大量的絮狀物時，表明微生物己繁殖，可用作接種液。一般馴化過程需3-8d。
4.3 鹽溶液
4.3.1 磷酸鹽緩沖溶液：將8.5g磷酸二氫鉀（kH2PO4)、 21.8g磷酸氫二鉀（K2HPO4)、 33.4g七水合磷酸氫二鈉（Na2HPO4?7H2O）和1.7 g氯化銨(NH4Cl)溶于水中，稀釋至1 000 ml，此溶液在0~4℃可穩定保存6個月。此溶液的pH值為7.2。
4.3.2 硫酸鎂溶液，ρ(MgSO4)= 11.0g/L：將22.5 g七水合硫酸鎂（MgSO4?7H2O）溶于水中，稀釋至1 000 ml，此溶液在0~4℃可穩定保存6個月，若發現任何沉淀或微生物生長應棄去。
4.3.3 氯化鈣溶液，ρ(CaCl2)=27.6 g/L：將27.6g無水氯化鈣（CaCl2)溶于水中，稀釋至1000 ml, 此溶液在0~4℃可穩定保存6個月，若發現任何沉淀或微生物生長應棄去。
4.3.4 氯化鐵溶液，ρ (FeCl3）=0.15 g/L：將0.25 g六水合氯化鐵（FeCI3?6H2O）溶于水中，稀釋至 1 000 ml，此溶液在0~4℃可穩定保存6個月，若發現任何沉淀或微生物生長應棄去。
4.4 稀釋水：在5-20L的玻璃瓶中加入一定量的水，控制水溫在(20±1)℃，用曝氣裝置(5.9)至少曝氣1h，使稀釋水中的溶解氧達到8mg/L以上。使用前每升水中加入上述四種鹽溶液(4.3)各 1.0 ml,混勻，20℃保存。在曝氣的過程中防止污染，特別是防止帶入有機物、金屬、氧化物或還原物。
稀釋水中氧的質量濃度不能過飽和，使用前需開口放置1h，且應在24 h內使用。剩余的稀釋水應棄去。
4.5 接種稀釋水：根據接種液的來源不同，每升稀釋水(4.4）中加入適量接種液(4.2)：城市生活污水和污水處理廠出水加1~10 ml，河水或湖水加10~100 ml，將接種稀釋水存放在（20±1)℃的環境中，當天配制當天使用。接種的稀釋水pH值為7.2, BOD5應小于1.5 mg/L。
4.6 鹽酸溶液，c(HCl)=0.5 mol/L：將40 mL濃鹽酸（HCI)溶于水中，稀釋至1 000ml。4.7氫氧化鈉溶液，C(NaOH)=0.5 mol/L：將20 g氫氧化鈉溶于水中，稀釋至1 000ml。
4.8 亞硫酸鈉溶液，c(Na2SO3)=0.25 mol/L：將1.575 g亞硫酸鈉（Na2SO3）溶于水中，稀釋至1 000 ml。此溶液不穩定，需現用現配。
4.9 葡萄糖-谷氨酸標準溶液：將葡萄糖（C6H12O6，優級純）和谷氨酸（HOOC-CH2-CH2-CHNH2-COOH,優級純）在130℃干燥lh，各稱取150mg溶于水中，在1 000 ml容量瓶中稀釋至標線。此溶液的BOD5 為（210±20) mg/L，現用現配。該溶液也可少量冷凍保存，融化后立刻使用。
4.10 丙烯基硫脈硝化抑制劑，ρ(C4H8N2S)=1.0 g/L：溶解0.20 g丙烯基硫脈(C4H8N2S)于200 ml水中混合，4℃保存，此溶液可穩定保存14d。
4.11 乙酸溶液，1+1。
4.12 碘化鉀溶液，ρ (Kl)=100g/L：將10g碘化鉀（KI）溶于水中，稀釋至100ml。
4.13 淀粉溶液，ρ =5g/L：將0.50g淀粉溶于水中，稀釋至100ml。
5 儀器和設備
本標準除非另有說明，分析時均使用符合國家A級標準的玻璃量器。本標準使用的玻璃儀器須清潔、 無毒性和可生化降解的物質。
5.1 濾膜：孔徑為1.6μm。
5.2 溶解氧瓶：帶水封裝置，容積250~300 ml。
5.3 稀釋容器：1000~2000 ml的量筒或容量瓶。
5.4 虹吸管：供分取水樣或添加稀釋水。
